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随着科学技术的不断发展,人们观察微观世界的手段也日趋精良。普通光学显微镜的分辨率约为0.2μm,可放大1000 倍左右,能识别细胞和组织的一般微细结构。透射电子显微镜的分辨率一般为0.2nm,可放大几万到几十万倍,能识别更微细的结构。
组织学与胚胎学的研究方法很多,并随着科学技术的发展,不断地引用或创建新的技术,在应用中要根据研究的目的和内容,选择相应的技术方法才能获得预期的效果。这里仅就最常用最基本的一些方法简要介绍如下。

应用光学显微镜观察机体各部分的微细结构时,首先应把所要观察的材料制成薄片,最基本的就是切片方法。石蜡切片术(paraffin sectioning)是经典而最常用的技术。其大致过程为:
取材和固定:取人体或动物新鲜的组织块(多不超过10cm大小),立即投入固定液(如甲醛溶液等)中进行固定,防止离体后结构发生变化,使其尽可能保持活体时的结构状态。
脱水和包埋:把固定好的组织块用乙醇脱尽其中的水分;由于乙醇不溶于石蜡,故再用二甲苯置换出组织块中的乙醇;然后将组织块置于融化的石蜡中,让蜡液浸入组织细胞,待冷却后组织便具有了石蜡的硬度。
切片和染色:将包有组织的蜡块用切片机切为5~10μm的薄片,贴于载玻片上,脱蜡后进行染色,以提高组织成分的反差,利于观察。最常用的是苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin),简称HE染色。苏木精为碱性染液,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色,称此为嗜碱性(basophilia);伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色,称此为嗜酸性(acidophilia);对碱性和酸性染液亲和力都不强的结构,称为中性(neutrophil)。

封片:切片经脱水等处理后,滴加中性树胶,用盖玻片密封备用。
除HE染色法外,还有许多种染色方法,能特异性地显示某种细胞,或细胞外基质成分,或细胞内的某种结构。如用硝酸银将神经细胞染为黑色(镀银染色法),用醛复红将弹性纤维和肥大细胞的分泌颗粒染为紫色。这些染色方法习惯统称为特殊染色。另外,在取动物组织材料之前,为显示某种细胞,还可进行活体染色,即将无毒或毒性小的染料经静脉注入后,再取材制成切片观察。如注入的锥虫蓝(台盼蓝)可被肝、脾等器官内的巨噬细胞吞噬,这些细胞因含有了大量蓝色颗粒而易于辨认。

①涂片:血液等液体材料,可直接在玻片上涂片,干燥后再进行固定和染色;②铺片:疏松结缔组织和肠系膜等薄层组织,可在玻片上撕开展开,制成铺片,待干燥后进行固定和染色;③磨片:骨和牙等坚硬组织除用酸(如稀硝酸等)脱钙后再按常规制成切片外,还可直接研磨成薄的磨片进行染色观察;④冷冻切片:对要进行化学反应的某些组织标本,为保存蛋白质(包括酶)的结构和活性,常把组织块经液氮(-196℃)冷冻后,用恒冷箱切片机切片。
2.电镜技术

透射电镜是以电子束为光源,穿透力低,而放大倍数和分辨率比光镜大得多,其分辨率接近01nm,可放大几万到几十万倍。透射电镜对所观察的组织标本要求非常严格,机体死亡后数分钟内取材,组织块(约1mm3)用戍二醛或锇酸固定,树脂包埋,超薄切片50~80nm,再经醋酸铀和柠檬酸铅等重金属盐染色,形成明显的黑白反差。电镜下所见的结构称超微结构(ultrastructure)。超微结构被金属所染部位,在荧光屏上显得暗,图像较黑,为电子密度高;反之则称为电子密度低。

扫描电镜是用来观察细胞和组织表面结构的。样品制备较简单,组织固定后勿需包埋与切片,经脱水、干燥,再于其表面喷镀薄层碳与金属膜,即可置于电镜下观察,在荧光屏上进行电子扫描,显像摄拍。其特点是景深长,1mm左右的凹凸不平的表面也能清晰成像,样品表面的金属膜可提高其导电性和图像反差,标本图像具有真实的立体感。

