获得微生物纯培养的分离方法

 自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少量的样品也是许多微生物共存的群体。要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的培养。

 微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。

微生物的分离纯化，通常是研究和利用微生物的基础，是微生物工作中最重要的环节之一，最常用的方法有：平板划线法、稀释平板法、单细胞挑取法、利用选择培养基分离法、小滴分离法等。

1.平板划线法

平板划线法是将已熔化的培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，用接种环挑取少许待分离的材料，在培养基表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物将随着划线次数的增加而分散，经保温培养形成菌落。划线开始的部分细菌分散度小，形成的菌落往往连在一起。由于连续划线，微生物逐渐减少，划到最后，常可形成单个孤立的菌落。这种单个菌落可能由一个细胞繁殖而来，故可获得纯培养。此法较为简便。

2.稀释平板法

包括混菌法和涂布法。

混菌法（也称倾注法）是最常用的一种，将待分离的材料作一系列稀释(如10-1、10-2、10-3•••)，取少许不同稀释液加入无菌培养皿中，再倒入熔化并冷却至45℃左右的琼脂培养基后，混匀，待培养基凝固后保温培养一定时间即有菌落出现。如果稀释得当，平皿上就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细胞繁殖形成的。挑取平板上分散的单菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

3.单细胞挑取法

单细胞挑取法是从待分离的材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养。具体方法是将显微镜挑取器装置在显微镜上，把一滴菌悬液置于载玻片上，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，在显微镜下对准某一个单独的细胞挑取，再接种到培养基上培养。此法需要非常熟练的操作人员，多限于高度专业化的科学研究中采用。

其简化版：小滴分离法

小滴分离法是将长滴管的顶端经火焰熔化后拉成毛细管，然后包扎灭菌备用。将欲分离的样品制成均匀的悬浮液，并做适当稀释。用无菌毛细管吸取悬浮液，在无菌的盖玻片上以纵横成行的方式滴数个小滴。倒置盖玻片于凹载片上，用显微镜检查。当发现某一小滴内只有单个细胞或孢子时，用另一支无菌毛细管将此小滴移入新鲜培养基内，经培养后则得到由单个细胞发育的菌落。 

4.选择性培养基分离法

选择性培养基分离法是指不同微生物需要不同的营养物质，对不同的化学试剂如消毒剂(酚)、染料(结晶紫等)、抗生素及其他物质等具有不同的抵抗能力。利用这些特性，便可配制成适合于某种微生物生长而限制其他微生物生长的各种选择性培养基，以达到纯种分离的目的。