第五节 菌种的衰退、复壮和保藏

一、菌种的衰退和复壮

在微生物的基础研究和应用研究中，选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由于各种各样的原因，要使菌种永远不变是不可能的，菌种衰退是一种潜在的威胁。只有掌握了菌种衰退的某些规律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。

 1、菌种的衰退及原因

菌种衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。

菌种衰退的原因：

（1）有关基因发生负突变导致菌种衰退

（2）表型延迟造成菌种衰退

（3）质粒脱落导致菌种衰退

连续传代－－加速衰退

 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退

2、菌种衰退的现象

菌落和细胞形态改变、生长速度缓慢，产孢子越来越少、 代谢产物生产能力下降，即出现负突变、

 致病菌对宿主侵染能力下降、 对外界不良条件的抵抗能力下降等

 3、菌种衰退的防止

控制传代次数(菌种一次传二管，一管作为原种保存，一管作为工作菌种）

 创造良好的培养条件

 利用不易衰退的细胞移种传代(利用芽胞和孢子传代移种）

 采用有效的菌种保藏方法

 讲究菌种选育技术

 定期进行分离纯化

4、菌种的复壮

狭义的复壮－－消极的措施

  是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。

广义的复壮－－积极的措施

   是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工作。也可从中选择到自发的正突变个体。

 5、菌种复壮的主要方法

通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。

二、  菌种的保藏

（一）菌种保藏的目的

   菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要的意义。

菌种保藏的目的：菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。

  （二）菌种保藏的原理

保持其遗传性，防止其发生变异。

选用优良的纯种，（最好是用其休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制的休眠状态，使其难以发生突变。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂等）

    3、菌种保藏的方法

各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。

一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。 

常用的菌种保藏方法：

斜面低温保藏法

 液体石蜡保藏法

 砂土管干燥保藏法

 麸皮保藏法

冷冻真空干燥保藏法

 液氮超低温保藏法

甘油悬液保藏法

 宿主保藏法

国内外菌种保藏机构：