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1 内容
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2 练习
内容
温度
温度是影响微生物生长的一个重要的因子。温度太低,可使原生质膜处于凝固状态,不能正常地进行营养物质的运输或形成质子梯度,因而生长不能进行。当温度升高时,细胞内化学和酶反应以较快的速率进行,生长速率加快。但当超过某一温度时,蛋白质、核酸和细胞其他成分就会发生不可逆的变性作用。
温度对微生物的影响表现在:
(1)影响酶活性。
(2)影响细胞质膜的流动性,温度高流动性大,有利于物质的运输;温度低流动性降低,不利于物质运输,因此温度变化影响营养物质的吸收与代谢产物的必泌。
(3)影响物质的溶解度。


pH
pH影响微生物的生长,因为pH通过影响细胞质膜的透性、膜结构的稳定性和物质的溶解性或电离性来影响营养物质的吸收,从而影响微生物的生长速率。
每种微生物都有一个可生长的pH范围,以及最适生长pH。大多数自然环境pH为5-9,适合于多数微生物的生长。只有少数微生物能够在低于pH2或大于pH10的环境中生长。
根据微生物生长对pH的要求范围,可分:嗜酸性微生物、嗜中性微生物、嗜碱性微生物。

氧
根据氧与微生物生长的关系可将微生物分为好氧、微好氧、氧的忍耐型、兼性厌氧、专性厌氧等五种类型。


营养物质的组成和浓度
培养基中的营养物质的浓度对微生物的生长也有很大影响。
影响表现:
微生物的生长速率:在微生物培养中,某种基本营养物质被耗尽也可使微生物的生长停止。即使培养基中没有任何毒物存在,而且其他营养物质仍很丰富,当添加少量这种营养物质时则微生物的生长可以重新开始;
微生物细胞的生物量:在分批培养中,当底物利用速率达到零时,微生物的生长也恰好到达稳定期,此时,底物转化为细胞的产率已达最大。
案例
生物活性物质(抗生素)的抑菌作用测定(滤纸片法)
将培养基平板置培养箱中培养,一方面试验菌(指示菌)开始生长繁殖;另一方面生物活性物质(抗生素)呈球面扩散,形成递减的梯度浓度,离纸片越近,生物活性物质(抗生素)浓度越大,离纸片越远生物活性物质(抗生素)浓度越小。
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定生物活性物质(抗生素)的敏感程度或生物活性物质(抗生素)对指示细菌的抑菌程度(抑菌试验)。生物活性物质(抗生素)浓度越高,抑菌圈越大。在抑菌圈的边缘处,琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的最低抑菌浓度(MIC)。抑菌圈直径与生物活性物质(抗生素)对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
准备:牛肉膏蛋白胨固体培养基,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,阿莫西林,黄芪多糖,直径为6mm的滤纸片,培养皿等
方法:
1)倒平板:将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化,倒在培养皿内,每皿约20ml,凝固。
2)标记:菌种、滤纸片摆放位置、药物(生物活性物质)及其浓度
3)制备菌悬液:用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。
4)菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5)滤纸片浸药:用无菌镊子夹取无菌的滤纸片沾取待测药液(不同的稀释度的生物活性物质)。
6)放置滤纸片:将沾取药液(生物活性物质)的滤纸片放于预先标记好的培养基平皿上,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。
7)培养:置平板在37 ℃培养16-18 h。
8)观察:用毫米尺量取抑菌圈直径,得出结论。

