题目

实验十六  环境因素对微生物生长发育的影响                （3学时）

详细内容

目的：了解环境因素（物理、化学、生物及营养等）对微生物生长发育的影响；学会控制环境条件。

重点：掌握测定环境因素影响的方法

内容：

实验十六 环境因素对微生物生长发育的影响

一、温度对微生物生长发育的影响

微生物生长繁殖需要一定的温度条件，每种微生物都有它的生长温度范围，若温度超过最高或低于最低生长温度时，微生物均不能生长，或处于休眠状态，甚至死亡。

根据微生物最适生长温度的范围，可将微生物分为低温型、中温型和高温型三类。大多数微生物属中温型，它们适宜生长的温度在25～40℃之间，故实验室采用28～30℃来培养微生物。若要确定某种微生物的最适生长温度，应进行测定。

二、生长因素对微生物生长的影响

生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之间的拮抗现象是普遍存在于自然界的，许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另一些抗生素对多种细菌有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有作用，称为广谱抗生素。

利用滤纸片法测定青霉素、链霉素（或土霉素）的抗菌谱，根据抑菌圈的有无及大小判断青霉素、链霉素（或土霉素）对不同类型微生物的影响，初步判断其抗菌谱。

三、化学因素对微生物生长的影响

一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。因此，在实验室内和生产上常利用某些化学药剂进行杀菌或消毒。常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂（酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子或与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活，重金属盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生鳌合作用而使之变为无效化合物；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活；氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下可抑制细菌生长，染料对细菌的作用具有选择性，革兰氏阳性菌普遍比革兰氏阴性菌对染料更加敏感；表面活性剂能降低溶液表面张力，这类物质作用于微生物细胞膜，改变其透性，同时也能使蛋白质变性。

不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不同，此外，药剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。应用前需进行试验，灵活选择。

指

导：

一、温度对微生物生长发育的影响

1.接种：取牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基9支，用接种环按无菌操作法分别在斜面上划直线接种大肠杆菌、枯草杆菌以及金黄色葡萄球菌（勿划破培养基）。

2.培养：将已接种的斜面培养基，分别放在4℃、37℃、50℃温度下培养。

3.观察：于培养48h、72h后观察生长情况，确定其生长最适温度。

实验报告

列表说明温度对微生物生长的影响

	金黄色葡萄球菌	大肠杆菌	枯草杆菌
4℃
37℃
50℃

二、生长因素对微生物生长的影响

1.制平板：取无菌平皿二套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。

2.制备菌悬液：取无菌水2支，用接种环分别取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌各1～2环接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。

3.接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1mL接种于平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。

注意：做好标记。

4.浸药：将灭菌滤纸片浸入供试药剂（青霉素、链霉素）中。

5.加药剂：用无菌镊子夹取浸药滤纸片（注意：应将药液沥干），分别平铺于同一含菌平板上（注意药剂之间勿互相沾染）。并在平皿背面做好标记。

6.培养：将平皿倒置于37℃下24h（或28℃下48～72h）后观察结果。

实验报告

取出培养皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并测量抑菌圈的大小。将观察测量结果填入下表中。

	金黄色葡萄球菌	大肠杆菌
青霉素
链霉素

三、化学因素对微生物生长的影响

1.制平板：取无菌平皿二套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。

2.制备菌悬液：取无菌水1支，用接种环取金黄色葡萄球菌1～2环接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。

3.接种：用无菌吸管吸取已制好的菌悬液0.1mL接种于平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。将已涂布好的平板底皿划分成5等份，每一等份内标明一种消毒剂的名称。

注意：做好标记。

4.浸药：将灭菌滤纸片浸入供试药剂（2.5%碘酒，0.1%升汞，红药水，1%来苏儿，紫药水）中。

5.加药剂：用无菌镊子夹取浸药滤纸片，分别平铺于含菌平板已标记的相应区域中。

注意：取出滤纸片时保证过滤纸片所含消毒溶液量基本一致，并在试管内壁沥去多余药液。

6.培养：将平皿倒置于37℃下24h（或28℃下48～72h）后观察结果。

实验报告

取出培养皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并测量抑菌圈的大小。将观察测量结果填入下表中。

	金黄色葡萄球菌
2.5%碘酒
0.1%升汞
红药水
1%来苏儿
紫药水

4.素材：

一、温度对微生物生长发育的影响

1.菌种：培养24h的大肠杆菌、枯草杆菌以及金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2.培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基

3.仪器及其他用具：接种环，酒精灯等

二、生长因素对微生物生长的影响

1.菌种：培养24～48h的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌斜面菌种。

2.培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，200μg/L链霉素, 200μg/L青霉素。

3.仪器及其他用具：无菌平皿，无菌水，无菌吸管（1mL）,玻璃涂棒，无菌镊子，直径0.6cm的无菌圆形滤纸片。

三、化学因素对微生物生长的影响

1.菌种：金黄色葡萄球菌

2.培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基

3.2.5%碘酒，0.1%升汞，红药水，1%来苏儿，紫药水等。

4.其他：无菌培养皿，0.5cm无菌圆形滤纸片，玻璃涂棒，接种环，无菌镊子等。