题目
实验十七 水的细菌学检查 （3学时）
详细内容
目的：学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
重点：掌握测定方法
难点：学会菌落计数和计算方法
内容：
实验十七 水的细菌学检查
水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤迳流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每ml不超过100个。细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长的菌落数。
应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
指导：
一．水样的采取
1.自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼三分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以无菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
2.池水、河水或湖水：应取距水面10～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
二、细菌总数测定
1.自来水
（1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。
（2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
（3）另取一空的灭菌培养皿倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml，作空白对照。
（4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。
两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。
2.池水、河水或湖水等
（1）稀释水样：取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污染程度而定，以培养后平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
（2）自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
（3）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。
（4）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。
三．菌落计数方法
1.先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小平到平板的一半，而其余的一半菌落又分布很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
2.首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表，例1）。
3.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数（见表，例2及例3）。
4.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表，例4）。
5.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表，例5）。
6.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表，例6）。
表 ：计算菌落总数方法举例
| 例次 | 不同稀释度的平均菌落数 | 两个稀释度菌落数之比 | 菌落总数（个/ml） | 备注 | ||
| 10-1 | 10-2 | 10-3 | ||||
| 1 | 1365 | 164 | 20 | -- | 16400或1.6×104 | 两位以后的数字采取四舍五入的方法去掉 |
| 2 | 2760 | 295 | 46 | 1.6 | 37750或3.8×104 | |
| 3 | 2890 | 271 | 60 | 2.2 | 27100或2.7×104 | |
| 4 | 无法计数 | 1650 | 513 | -- | 513000或5.1×105 | |
| 5 | 27 | 11 | 5 | -- | 270或2.7×102 | |
| 6 | 无法计数 | 305 | 12 | -- | 30500或3.1×104 | |
实验报告
1.结果
（1）自来水
| 平板 | 菌落数 | 1ml自来水中细菌总数 |
| 1 | ||
| 2 |
（2）池水、河水或湖水等
| 稀释度 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | |||
| 平 板 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 | 2 |
| 菌落数 | ||||||
| 平均菌落数 | ||||||
| 计算方法 | ||||||
| 细菌总数/ml | ||||||
2.从自来水的细菌总数结果来看，是否符合饮用水标准？
3.你所测的水源水的污秽程度如何？
素材：
1.培养基： 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。
2.仪器及其他用具：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
