胸腺素

1966年戈尔茨坦(Goldstein)和怀特(White)首先从小牛胸腺组织中提取得到一种具有生物活性的物质，命名为胸腺素(thymocin)，随后进行了临床应用。

由于小牛胸腺来源有限，难于大量生产，而我国猪源比较丰富，以猪胸腺为原料，参考牛胸腺组分5的提取、纯化方法而制得的猪胸腺激素注射液，与国外的小牛激素作比较，活力相当，无明显不良反应。      

    1、结构和性质  胸腺激素组分5是由在80℃热稳定的40-50种多肽组成的混合物，Mr1000-15000，pI3.5-9.5。

   这些多肽共分三个区域：

目前已经研究清楚，胸腺素组分5中，胸腺素α1、α5、α7、β3和β4等是具有调节胸腺依赖性淋巴细胞分化和体外免疫反应的活性组分。它们的主要生物学功能表现在：连续诱导T细胞分化发育的各个阶段，放大并增强成熟T细胞对抗原或其他刺激物的反应，维持机体的免疫平衡状态。

2、提取工艺：      

提取：取新鲜或冷冻胸腺，除去脂肪并绞碎后，加入3倍量生理盐水，于玻璃匀浆器中制成匀浆，1400Xg离心后得提取液 (组分1).

     加热去杂蛋白： 提取液80℃加热15min，以沉淀对热不稳定部分。离心去沉淀，得上清液(组分2) 。

   沉淀：上清冷却至4 ℃，加入5倍体积的-10℃丙酮，过收集沉淀，用丙酮乙醚脱水干燥后得丙酮粉(组分3)。

   分段盐析：将丙酮粉溶于pH7.0的磷酸盐缓冲液中，加硫酸铵至饱和度为0.25，离心除去沉淀，上清液(组分4)调pH为4.0，加硫酸铵至饱和度为0.50，得盐析物。

   超滤： 将盐析物溶于pH8.0的10mmol/L Tris-Hcl缓冲液中，超滤消除大分子杂蛋白、硫酸铵，取相对分子质量在15000以下的超滤液。

   脱盐、干燥超滤液：经Sephadex G-25脱盐后，冷冻干燥得胸腺素(组分5)。

                                  胰岛素

        胰岛素原是由一条连接肽（C肽）一端与胰岛素的A链的N端相连，另一端与B端相连。胰岛素由51个氨基酸组成。有A、B两链，（A链21个、B链30个），两链由两个二硫键相连。

       1、胰岛素结构与理化性质：白色或类白色的扁斜形六面体结晶粉末； 难溶于水，易溶于稀酸或稀碱溶液，也易溶于80%以下的乙醇或丙酮。在90%以上乙醇或80%以上丙酮中难溶。在高浓度锌的solu中pH6～8时胰岛素溶解度急剧下降，pI5.30-5.35，分子量5000多

        易与Zn2+,Cd2+ ,Co2+等2价金属离子结合。在锌盐存在下，胰岛素的pI可增至6.0左右。

   

   2、工艺路线:

•（1）胰脏质量是胰岛素生产中的关键。采摘胰脏要注意保持腺体组织的完整，避免摘断，要立即深冻。胰尾部分含胰岛素含量较高。并贮存不宜过久。

（2）第一次提取用86%乙醇，与胰糜混合后，其最终百分浓度为70%左右，不仅能完全溶解胰岛素，而且能抑制蛋白水解酶的活力。

（3）草酸是弱酸，较温和，控制pH在2.5,不仅胰岛素较稳定，还能抑制蛋白水解酶的活力。

（4）提取温度控制在10-15℃ ，因为温度偏高会增强酶对胰岛素的破坏作用，会使油脂含量增加，影响分离工序。

•（5）碱化时pH控制在8.2-8.4，pH低了除碱性蛋白不完全，且不易过滤，但在碱性条件下，胰岛素不稳定，其蛋白分解酶活力增加，因此pH不应过高，操作应尽快进行。

（6）浓缩能直接影响胰岛素的收率，采用离心薄膜浓缩，能缩短受热时间，避免效价损失。

（7）浓缩除去乙醇后，油脂与水呈乳浊液，采取速热速冷，先热后冷，可将乳浊液破坏分成两相，分离油脂，也可除去部分杂蛋白。

•（8）在常规的结晶胰岛素中，尚含有一些杂蛋白抗原成分，如胰岛素原，胰高血糖素等。美英药典主要控制两个指标，即分子量大于胰岛素的蛋白质和胰岛素原,（胰岛素原等大分子杂质使病人使用后出现付作用，产生抗体引起皮下脂肪萎缩）。

    用超细sephadexG-50凝胶过滤，可使结晶胰岛素进一步纯化。是由一条连接肽（C肽）一端与胰岛素的A链的N端相连，另一端与B端相连。胰岛素由51个氨基酸组成。有A、B两链，（A链21个、B链30个），两链由两个二硫键相连。