知识扩展：

肝素之管——抗凝血药肝素的发现

                                 透明质酸

1、结构与性质

透明质酸（HA）是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺双糖单元交替连接而成的直连酸性粘多糖，分子量50万~200万。

透明质酸为白色、无定形固体，无臭无味，有吸湿性，不溶于水，不溶于有机溶剂，具有较高的黏度特性。

（1）动物组织提取法：

以人脐带、鸡冠、哺乳动物血清、牛眼玻璃体、鲨鱼皮及鲸鱼软骨等为原料。经过一系列的操作制得。

工艺过程包括提取，除蛋白等杂质，分级分离有机溶剂沉淀等。

纯化方法有sevag法、离子交换层析法、制备电泳法、凝胶过滤法和吸附法等。该工艺原料来源局限性大，产品提取率极低，仅为1％左右，工艺程序复杂，生产成本高，不宜进行工业化生产。

（2）微生物发酵法

将鸡冠碎片加入到丙酮中，浸泡过夜至鸡冠脱水变硬。然后置于瓷盘中进行干燥，干燥后经粉碎机粉碎成粉状。

将鸡冠粉倒入搪瓷罐中，加入6～7倍蒸馏水，搅拌均匀，浸泡24h以上，使鸡冠粉充分溶胀，然后过滤，收集滤液，滤渣再按同样方法浸泡3次，合并3次过滤液。

再将滤液倒入陶瓷缸中，搅拌下加入10%的固体氯化钠，并加入等体积的氯仿，搅拌3h后，分出水相。向分出的水相中加入2倍体积的95%乙醇，搅拌均匀，静置过夜，沉淀出透明质酸，然后滤干沉淀物，干燥后得粗品。

粗品再溶于4倍体积的0.1mol/L氯化钠溶液中，用稀盐酸调节pH=4.5～5，再加入等体积的氯仿，静置分层后，吸出上层水相。水相用8%氢氧化钠溶液调节pH=7.5，加入链酶蛋白酶，37℃下保温24h。

再用等体积的氯仿萃取处理2次，合并上层水相，下层液体回收氯仿。水相中加入等体积的1%氯化十六烷基吡啶溶液（CPC），搅拌均匀，静置沉淀，过滤，收集沉淀。沉淀再用2～3倍体积的0.4mol/L氯化钠溶解，过滤，滤液中再加入3倍体积95%乙醇，静置沉淀，吸去上层乙醇，下层再用95%乙醇反复沉淀2次，下层沉淀物吊滤，干燥，再用丙酮洗涤2次，真空干燥，可得成品。

CPC络合沉淀与解离步骤是分离提纯酸性粘多糖常用的方法之一。其特点是纯化效率高、回收率高，可以从很低溶度的溶液中将透明质酸或其他酸性粘多糖沉淀出来。

它的原理是CPC为季铵盐，在水溶液中带正电荷；透明质酸或其他粘性多糖，在水溶液中带负电荷。在低盐浓度下，透明质酸与CPC络合沉淀，在高浓度下，HA-CPC络合物解离溶解。

利用这一性质，可除去不能与CPC络合并沉淀的杂质。透明质酸与其他酸性粘多糖聚阴离子的电荷密度不同，与CPC络合生成沉淀时盐浓度可以不同，络合沉淀物解离所需的最低盐浓度也不同。